质粒包装病毒伯远生物质粒包装病毒伯远生物是国家级专精特新小巨人企业国家级重点实验室牵头多项省部级重大专项公司科研技术人员500硕博占比40%以上作为功能基因研究综合性平台15年技术沉淀每年完成功能基因研究数量50000长期服务课题组10000含协和、同济、华西、湘雅、中山、军事医学院等顶尖医学研究机构各类仪器设备投资超1个亿案例展示案例展示1、慢病毒感染细胞效率实例图 慢病毒感染细胞效率2、慢病毒体内表达应用实例图 慢病毒体内表达应用实例Shi Y, et al. 2017。参考文献Mátrai J, Chuah MK, VandenDriessche T. Recent advances in lentiviral vector development and applications.Mol Ther. 2010;18(3):477-490.Shi Y, Ping YF, Zhou W, et al. Tumour-associated macrophages secrete pleiotrophin to promote PTPRZ1 signalling in glioblastoma stem cells for tumour growth.Nat Commun.2017;8:15080.我司默认采用三质粒系统进行包毒若为过表达慢病毒包装则需目的基因在3000bp以内如有个性化要求请致电详联背景说明背景说明通常LVs是通过反式互补产生的其表达系统由用于表达特定基因的目的质粒及病毒gag/pol、Rev和VSVG等组分的包装质粒组成其中包装质粒提供了病毒基因组mRNA包装成完整毒粒所必需的结构蛋白、聚合酶和包膜蛋白。LVs具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点区别于一般的逆转录病毒载体其对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。携带有外源基因的LVs在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒通过感染细胞或活体组织实现外源基因在细胞或活体组织中表达。通常根据不同的实验目的针对LVs改造以进行启动子活性研究、基因表达研究、基因沉默等研究。外源基因则通过载体中的多克隆位点插入LVs以进行表达。图 反式互补生产LVsMátrai et al. 2010。原理简介携带有外源基因的LVs在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒通过感染细胞或活体组织实现外源基因在细胞或活体组织中表达。LVs包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞在细胞中进行病毒的包装包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中离心取得上清液后可直接用于宿主细胞的感染目的基因进入到宿主细胞之后经过反转录整合到基因组从而高水平的表达效应分子。通常根据不同的实验目的针对LVs改造以进行启动子活性研究、基因表达研究、基因沉默等研究。外源基因则通过载体中的多克隆位点插入LVs以进行表达。图 慢病毒包装和侵染过程示意图我司载体简介我司可提供丰富的LVs产品体系用于操作编码基因和非编码基因如lncRNA、miRNA、circRNA。我司原始细胞慢病毒包装载体列表可根据不同的需求选择不同的载体插入不同的位置服务流程服务流程客户在线下单——订单/实验材料确认——构建LVs包装载体与目的载体——共转染293T细胞——病毒上清收集——病毒浓缩和纯化——慢病毒鉴定包括病毒滴度、质粒残留、宿主DNA残留、BSA残留、支原体检测、衣原体检测、内毒素检测、细菌及真菌检测等——可选后续感染目的细胞及相关实验我司默认采用三质粒系统进行包毒若为过表达慢病毒包装则需目的基因在3000bp以内如有个性化要求请致电详联服务内容及说明服务内容及说明慢病毒滴度鉴定方法检测项目原理优点缺点GEP荧光计数流式细胞计数经典方法重复性好检测活性病毒感染滴度仪器和操作要求高操作复杂绝对定量qPCR病毒感染工具细胞后抽提整合目的片段的细胞基因组DNA与标准品比较检测活性病毒感染滴度最接近真实滴度仪器和操作要求高操作复杂RT-qPCR病毒梯度稀释感染工具细胞后抽提RNART-qPCR检测病毒基因组表达检测活性病毒感染滴度受限于病毒感染后检测基因表达丰度p24核心蛋白ELISA定量对慢病毒颗粒稳定表达的p24蛋白进行ELISA检测简单、快捷、重复性好反映的是病毒物理颗粒数不是活性滴度适用范围现在LV系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、miRNA研究以及活体动物实验中。客户下单及项目信息填写在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录请客户按照页面提示填写目的基因信息、载体构建详情后续感染的细胞可选自行提供或我司提供。实验信息实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户并发送实验报告查看网址。实验结题后实验报告、检测结果可在线查看或打印并永久保留。实验周期致电详询实验交付内容1、所有实验的原始数据包括实验过程、实验试剂与设备等2、重组载体的全序列信息和注释信息3、重组载体的酶切图谱4、重组载体测序结果5、引物序列6、病毒质控鉴定报告与结果分析包含滴度鉴定、BCA检测、支原体检测等可选7、高滴度慢病毒载体不低于108TU/mL8、阴性对照病毒9、稳转细胞株可选。质质粒包装病毒通常是指把目的载体质粒和包装相关质粒一起转入包装细胞借助细胞在体内组装出病毒颗粒最常见的是慢病毒包装体系通常由转移载体、包装质粒和包膜质粒共同完成。
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质粒包装病毒伯远生物质粒包装病毒伯远生物是国家级专精特新小巨人企业国家级重点实验室牵头多项省部级重大专项公司科研技术人员500硕博占比40%以上作为功能基因研究综合性平台15年技术沉淀每年完成功能基因研究数量50000长期服务课题组10000含协和、同济、华西、湘雅、中山、军事医学院等顶尖医学研究机构各类仪器设备投资超1个亿案例展示案例展示1、慢病毒感染细胞效率实例图 慢病毒感染细胞效率2、慢病毒体内表达应用实例图 慢病毒体内表达应用实例Shi Y, et al. 2017。参考文献Mátrai J, Chuah MK, VandenDriessche T. Recent advances in lentiviral vector development and applications.Mol Ther. 2010;18(3):477-490.Shi Y, Ping YF, Zhou W, et al. Tumour-associated macrophages secrete pleiotrophin to promote PTPRZ1 signalling in glioblastoma stem cells for tumour growth.Nat Commun.2017;8:15080.我司默认采用三质粒系统进行包毒若为过表达慢病毒包装则需目的基因在3000bp以内如有个性化要求请致电详联背景说明背景说明通常LVs是通过反式互补产生的其表达系统由用于表达特定基因的目的质粒及病毒gag/pol、Rev和VSVG等组分的包装质粒组成其中包装质粒提供了病毒基因组mRNA包装成完整毒粒所必需的结构蛋白、聚合酶和包膜蛋白。LVs具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点区别于一般的逆转录病毒载体其对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。携带有外源基因的LVs在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒通过感染细胞或活体组织实现外源基因在细胞或活体组织中表达。通常根据不同的实验目的针对LVs改造以进行启动子活性研究、基因表达研究、基因沉默等研究。外源基因则通过载体中的多克隆位点插入LVs以进行表达。图 反式互补生产LVsMátrai et al. 2010。原理简介携带有外源基因的LVs在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒通过感染细胞或活体组织实现外源基因在细胞或活体组织中表达。LVs包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞在细胞中进行病毒的包装包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中离心取得上清液后可直接用于宿主细胞的感染目的基因进入到宿主细胞之后经过反转录整合到基因组从而高水平的表达效应分子。通常根据不同的实验目的针对LVs改造以进行启动子活性研究、基因表达研究、基因沉默等研究。外源基因则通过载体中的多克隆位点插入LVs以进行表达。图 慢病毒包装和侵染过程示意图我司载体简介我司可提供丰富的LVs产品体系用于操作编码基因和非编码基因如lncRNA、miRNA、circRNA。我司原始细胞慢病毒包装载体列表可根据不同的需求选择不同的载体插入不同的位置服务流程服务流程客户在线下单——订单/实验材料确认——构建LVs包装载体与目的载体——共转染293T细胞——病毒上清收集——病毒浓缩和纯化——慢病毒鉴定包括病毒滴度、质粒残留、宿主DNA残留、BSA残留、支原体检测、衣原体检测、内毒素检测、细菌及真菌检测等——可选后续感染目的细胞及相关实验我司默认采用三质粒系统进行包毒若为过表达慢病毒包装则需目的基因在3000bp以内如有个性化要求请致电详联服务内容及说明服务内容及说明慢病毒滴度鉴定方法检测项目原理优点缺点GEP荧光计数流式细胞计数经典方法重复性好检测活性病毒感染滴度仪器和操作要求高操作复杂绝对定量qPCR病毒感染工具细胞后抽提整合目的片段的细胞基因组DNA与标准品比较检测活性病毒感染滴度最接近真实滴度仪器和操作要求高操作复杂RT-qPCR病毒梯度稀释感染工具细胞后抽提RNART-qPCR检测病毒基因组表达检测活性病毒感染滴度受限于病毒感染后检测基因表达丰度p24核心蛋白ELISA定量对慢病毒颗粒稳定表达的p24蛋白进行ELISA检测简单、快捷、重复性好反映的是病毒物理颗粒数不是活性滴度适用范围现在LV系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、miRNA研究以及活体动物实验中。客户下单及项目信息填写在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录请客户按照页面提示填写目的基因信息、载体构建详情后续感染的细胞可选自行提供或我司提供。实验信息实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户并发送实验报告查看网址。实验结题后实验报告、检测结果可在线查看或打印并永久保留。实验周期致电详询实验交付内容1、所有实验的原始数据包括实验过程、实验试剂与设备等2、重组载体的全序列信息和注释信息3、重组载体的酶切图谱4、重组载体测序结果5、引物序列6、病毒质控鉴定报告与结果分析包含滴度鉴定、BCA检测、支原体检测等可选7、高滴度慢病毒载体不低于108TU/mL8、阴性对照病毒9、稳转细胞株可选。质质粒包装病毒通常是指把目的载体质粒和包装相关质粒一起转入包装细胞借助细胞在体内组装出病毒颗粒最常见的是慢病毒包装体系通常由转移载体、包装质粒和包膜质粒共同完成。
