前沿基于流式荧光法的多因子检测技术是在不同颜色或大小的编码微球上包被不同的特异性抗体以达到单个样本可同时检测多个靶标因子从而实现高通量的蛋白定量技术。云克隆公司有十多年的蛋白、抗体和ELISA试剂盒的研发经验通过采用和ELISA一致的抗体对筛选和试剂优化体系在此基础之上开发出了更高标准和更高性能的多因子检测试剂盒Multiplex Assay Kit力求为客户提供更便利更全面的分析工具。多因子检测试剂盒自上市以来备受科研工作者的青睐但由于和ELISA的操作方法大有不同大家在使用过程中可能会遇到各种操作方面的问题尤其是样本磁珠读数异常的问题较为常见。本期我们整理出可能原因和处理建议供大家参考1. 样本中的脂质、胶体或沉淀物等导致磁珠聚集和沉淀1所有样本在使用前建议再次4℃离心20-30分钟转速10,000×g。离心后取上清进行检测。冷冻样本建议解冻后按照上述方法再次离心后取上清检测。再次离心的原因是为了除去可能存在的任何碎片、脂质和细胞等杂质。这些杂质可能会在样本和磁珠孵育的过程中造成磁珠聚集和沉淀从而影响最终的磁珠读数。尤其是针对血浆样本细胞或组织裂解液或其他有粘性或者明显含有脂质、碎片的样本类型2对于某些粘性物质含量较大或颗粒物含量较多的样本可能需要重复离心2~3次才能获得完全澄清的上清液这对多因子检测至关重要3样本和磁珠一起孵育的过程中需保证充分振荡避免磁珠因振荡不足结块导致洗板不充分或者读数时无法获取足够的磁珠4组织匀浆类样本和磁珠反应时建议覆膜室温18-25℃避光振荡反应2h或者4℃过夜效果会优于37℃避光振荡1.5h。4℃震荡孵育过夜后需先在室温下振荡1h之后再进行后续步骤以避免孵育时间太久和低温导致的磁珠凝结5溶血样本中的细胞碎片等其它杂质太多会导致磁珠凝结另外红细胞裂解释放的血红蛋白等物质会影响检测结果溶血样本不建议进行检测。2. 磁珠保存不当造成读数异常磁珠需4℃避光保存不可置于-20℃冷冻保存或室温保存低温和长期室温会影响磁珠的性能导致结合效率降低影响检测结果。3. 磁珠在加入板孔前没有完全悬浮导致加入板孔中的磁珠数不足或磁珠在板孔间的均一性较差影响最终检测结果预混合磁珠使用前请用涡旋混合仪轻柔震荡防止磁珠沉降。加入板孔中时请保持预混磁珠处于悬浮状态。检测过程中预混合磁珠需避光。4. 洗板过程中由于洗板操作不当造成的磁珠丢失1请使用合适的磁力架需保证96孔板牢固吸附在磁力架底部洗板过程中请保持96孔板在磁力架上。建议手动洗板即用单通道或多通道移液器小心将板孔内液体移除残留在板孔内的少量液体无需吸干更不要在纸上拍打酶标板2若使用自动洗板机进行洗板请调整好吸液针和96孔板之间的高度以防吸液针触及板孔底部将磁珠吸出。请在熟练使用自动洗板机之后再进行正式实验。5. 读数之前没有充分悬浮板孔中的磁珠导致进样针堵塞或吸取的磁珠不足每次使用前请充分清洁进样针调整好进样针和板孔之间的高度。同时在读数前请充分振荡96孔板使板孔中的磁珠悬浮可借助涡旋振荡仪振荡或者移液器反复吹打使磁珠充分悬浮必要时也可进行超声处理使磁珠分散。6. 仪器使用或设置不当造成磁珠读数异常仪器在使用之前需进行校准和验证。针对不同的仪器需要调整进样针的高度如有必要可向厂家咨询仪器设置参数。云克隆多因子试剂盒操作视频详见:多因子检测试剂盒Multiplex Assay Kit磁珠读数异常原因及解决方案https://mp.weixin.qq.com/s/DaNwGG0zwP1hGbd88v5LTg多因子试剂盒常见问题原因及解决方案总结问题可能原因解决方案标准曲线差标准品准备不正确进行正确的标准品梯度稀释吸取及洗涤不充分充分的吸取及洗涤移液不精确检查和校正移液器精密度低磁珠洗涤不充分按说明书要求充分震荡洗涤和浸泡混匀不充分和吸取试剂不足充分混匀和吸取试剂重复利用吸头、容器和覆膜使用加样器要更换新的吸头、使用新的容器和覆膜加样不精确检查和校正移液器MFI值低每孔加的试剂量不精确校正移液器精确加入试剂温育时间不正确保证充足的温育时间温育温度不正确试剂要平衡至室温并保证准确的温育温度磁珠丢失确保洗板过程保持在磁力架上不要在吸水纸上拍打PE标记物失效更换试剂PE标记物稀释倍数不对按照说明书实验操作超出读数时间读数在说明书推荐的读数时间内读数样本值异常不正确的样本储存方式正确储存样本使用新鲜样本进行实验PE标记物稀释倍数不对按照说明书实验操作超出读数时间读数在说明书推荐的读数时间内读数不正确的样本储存方式正确储存样本使用新鲜样本进行实验样本收集和处理方法不正确采取正确的样本收集和处理方法待测物在样本中的含量低使用新鲜样本重复实验磁珠数量不足样本中的脂质、胶体或沉淀物导致珠粒聚集和沉淀使用前去除脂质、胶体、沉淀物等重新离心样品后取上清液检测磁珠在加入板孔前没有完全悬浮使用前用涡旋混合仪轻柔震荡预混合磁珠使其充分悬浮洗涤过程中磁珠丢失使用单通道或 者多通道移液枪在距离磁珠远处吸除缓冲液或者保持磁力的状态下连同磁力架一起翻转倒出液体读数前磁珠未完全重悬使用涡旋混合仪或者移液器吹打使磁珠完全悬浮仪器进样针堵塞清洁进样针或者调整进样针的高度至合适的位置必要时可对进样针进行超声检测武汉云克隆科技股份有限公司官方网站https://www.cloud-clone.cn/
多因子检测试剂盒（Multiplex Assay Kit）磁珠读数异常原因及解决方案
前沿基于流式荧光法的多因子检测技术是在不同颜色或大小的编码微球上包被不同的特异性抗体以达到单个样本可同时检测多个靶标因子从而实现高通量的蛋白定量技术。云克隆公司有十多年的蛋白、抗体和ELISA试剂盒的研发经验通过采用和ELISA一致的抗体对筛选和试剂优化体系在此基础之上开发出了更高标准和更高性能的多因子检测试剂盒Multiplex Assay Kit力求为客户提供更便利更全面的分析工具。多因子检测试剂盒自上市以来备受科研工作者的青睐但由于和ELISA的操作方法大有不同大家在使用过程中可能会遇到各种操作方面的问题尤其是样本磁珠读数异常的问题较为常见。本期我们整理出可能原因和处理建议供大家参考1. 样本中的脂质、胶体或沉淀物等导致磁珠聚集和沉淀1所有样本在使用前建议再次4℃离心20-30分钟转速10,000×g。离心后取上清进行检测。冷冻样本建议解冻后按照上述方法再次离心后取上清检测。再次离心的原因是为了除去可能存在的任何碎片、脂质和细胞等杂质。这些杂质可能会在样本和磁珠孵育的过程中造成磁珠聚集和沉淀从而影响最终的磁珠读数。尤其是针对血浆样本细胞或组织裂解液或其他有粘性或者明显含有脂质、碎片的样本类型2对于某些粘性物质含量较大或颗粒物含量较多的样本可能需要重复离心2~3次才能获得完全澄清的上清液这对多因子检测至关重要3样本和磁珠一起孵育的过程中需保证充分振荡避免磁珠因振荡不足结块导致洗板不充分或者读数时无法获取足够的磁珠4组织匀浆类样本和磁珠反应时建议覆膜室温18-25℃避光振荡反应2h或者4℃过夜效果会优于37℃避光振荡1.5h。4℃震荡孵育过夜后需先在室温下振荡1h之后再进行后续步骤以避免孵育时间太久和低温导致的磁珠凝结5溶血样本中的细胞碎片等其它杂质太多会导致磁珠凝结另外红细胞裂解释放的血红蛋白等物质会影响检测结果溶血样本不建议进行检测。2. 磁珠保存不当造成读数异常磁珠需4℃避光保存不可置于-20℃冷冻保存或室温保存低温和长期室温会影响磁珠的性能导致结合效率降低影响检测结果。3. 磁珠在加入板孔前没有完全悬浮导致加入板孔中的磁珠数不足或磁珠在板孔间的均一性较差影响最终检测结果预混合磁珠使用前请用涡旋混合仪轻柔震荡防止磁珠沉降。加入板孔中时请保持预混磁珠处于悬浮状态。检测过程中预混合磁珠需避光。4. 洗板过程中由于洗板操作不当造成的磁珠丢失1请使用合适的磁力架需保证96孔板牢固吸附在磁力架底部洗板过程中请保持96孔板在磁力架上。建议手动洗板即用单通道或多通道移液器小心将板孔内液体移除残留在板孔内的少量液体无需吸干更不要在纸上拍打酶标板2若使用自动洗板机进行洗板请调整好吸液针和96孔板之间的高度以防吸液针触及板孔底部将磁珠吸出。请在熟练使用自动洗板机之后再进行正式实验。5. 读数之前没有充分悬浮板孔中的磁珠导致进样针堵塞或吸取的磁珠不足每次使用前请充分清洁进样针调整好进样针和板孔之间的高度。同时在读数前请充分振荡96孔板使板孔中的磁珠悬浮可借助涡旋振荡仪振荡或者移液器反复吹打使磁珠充分悬浮必要时也可进行超声处理使磁珠分散。6. 仪器使用或设置不当造成磁珠读数异常仪器在使用之前需进行校准和验证。针对不同的仪器需要调整进样针的高度如有必要可向厂家咨询仪器设置参数。云克隆多因子试剂盒操作视频详见:多因子检测试剂盒Multiplex Assay Kit磁珠读数异常原因及解决方案https://mp.weixin.qq.com/s/DaNwGG0zwP1hGbd88v5LTg多因子试剂盒常见问题原因及解决方案总结问题可能原因解决方案标准曲线差标准品准备不正确进行正确的标准品梯度稀释吸取及洗涤不充分充分的吸取及洗涤移液不精确检查和校正移液器精密度低磁珠洗涤不充分按说明书要求充分震荡洗涤和浸泡混匀不充分和吸取试剂不足充分混匀和吸取试剂重复利用吸头、容器和覆膜使用加样器要更换新的吸头、使用新的容器和覆膜加样不精确检查和校正移液器MFI值低每孔加的试剂量不精确校正移液器精确加入试剂温育时间不正确保证充足的温育时间温育温度不正确试剂要平衡至室温并保证准确的温育温度磁珠丢失确保洗板过程保持在磁力架上不要在吸水纸上拍打PE标记物失效更换试剂PE标记物稀释倍数不对按照说明书实验操作超出读数时间读数在说明书推荐的读数时间内读数样本值异常不正确的样本储存方式正确储存样本使用新鲜样本进行实验PE标记物稀释倍数不对按照说明书实验操作超出读数时间读数在说明书推荐的读数时间内读数不正确的样本储存方式正确储存样本使用新鲜样本进行实验样本收集和处理方法不正确采取正确的样本收集和处理方法待测物在样本中的含量低使用新鲜样本重复实验磁珠数量不足样本中的脂质、胶体或沉淀物导致珠粒聚集和沉淀使用前去除脂质、胶体、沉淀物等重新离心样品后取上清液检测磁珠在加入板孔前没有完全悬浮使用前用涡旋混合仪轻柔震荡预混合磁珠使其充分悬浮洗涤过程中磁珠丢失使用单通道或 者多通道移液枪在距离磁珠远处吸除缓冲液或者保持磁力的状态下连同磁力架一起翻转倒出液体读数前磁珠未完全重悬使用涡旋混合仪或者移液器吹打使磁珠完全悬浮仪器进样针堵塞清洁进样针或者调整进样针的高度至合适的位置必要时可对进样针进行超声检测武汉云克隆科技股份有限公司官方网站https://www.cloud-clone.cn/
